Реферат: Ассоциации иммуногенетической системы HLA с развитием туберкулеза

Федеральноеагентство пообразованиюРФ

Государственноеобразовательноеучреждение

высшегопрофессиональногообразования

Курсоваяработа по иммунологии

на ТЕМУ: «Ассоциациииммуногенетическойсистемы HLAс развитиемтуберкулёза»

Челябинск2006

СОДЕРЖАНИЕ

Введение

Глава1. Физиологическаяроль главногокомплексагистосовместимостичеловека

Глава2. Ассоциациятуберкулёзас различнымигенетическимифакторами

Глава3. Персистентныебактериальныеинфекции: интерфейспатогена ииммунная системахозяина

3.1Персистентныемикобактериальныеинфекции

3.2Выживаниемикобактерий

3.3Выживаниевнутри макрофагов

3.4Иммунный ответна персистирующиемикобактерии

Глава4. CD-1 и CD-1-рестриктированныеТ-клетки приинфекциях, вызванныхвнутриклеточнымибактериями

4.1Атигенпрезентующиемолекулы

4.2Презентациямикобактериальныхлипидов группойI CD1 молекул

4.3ВнутриклеточнаялокализацияCD1 молекул

4.4Рецептор длятранспортаАГ

4.5CD1d иNКТ-клеткипри инфекциях

4.6αGalCerспецифическиактивируетCD1diNКТ-клетками

Глава5. Отличительныечастоты генотипацитокинов средиканадскихаборигенови кавказскихпопуляций

Глава6. Ассоциациятуберкулёзасо специфичностямигена HLA-DR-B1в различныхрегионах Тувы

Глава7. Распределениеантигеновкомплекса HLAу больныхтуберкулёзоми здоровых лицв татарскойпопуляции

Заключение

Приложения

Списоклитературы

ВВЕДЕНИЕ

Туберкулезявляется проблемоймирового масштаба.По данным ВОЗ, одна третьнаселения мираинфицированаMycobacterium tuberculosis.В 1998 году былозарегистрировано8 млн. новых случаевклиническоготуберкулезаи 1,9 млн. смертейот заболевания.Ожидается, чток 2010 году в миребудет около1 млрд. вновьинфицированных, более 200 млн.заболевших, а 70 млн. – умретот туберкулеза.В России ежегодноинфицируетсяоколо 9 тыс. детей(что на порядоквыше, чем в другихразвитых странах), а число больныхв 1997 г. по сравнениюс 1991 г. возрослов 2,5 раза.

Следуетотметить, чтоне все индивидыпосле контактас M. tuberculosisстановятсяинфицированными.Клиническиепризнаки туберкулезапроявляютсятолько у 10 %инфицированных.В настоящеевремя сталопонятно, чторазвитие инфекцииM. tuberculosis иклиническийтуберкулезобусловленосложным взаимодействиеммежду биологическимисвойствамисамого инфекционногоагента, средовымифакторами ифизиологическойиндивидуальностьючеловека.

У большинствалюдей сразуже после инфекцииM. tuberculosisразвиваетсяэффективныйиммунный ответ, ограничивающийраспространениеагента. Менее10 % инфицированных, у которых развиваетсязаболевание, имеют идентифицируемыефакторы риска, такие как диабет, СПИД, пожилойвозраст. У остальныхзаболевшихразвитие туберкулеза, по-видимому, обусловленокомплексныхвзаимодействиемгенетическихи средовыхфакторов.

Для каждойпопуляции мирабыли обнаруженысвои особенностив частотахантигенов HLA ихарактерныедля даннойпопуляцииассоциациис восприимчивостью(или резистентностью)к туберкулёзулёгких. Поэтомузадачей моейкурсовой былоисследованиеисточниковлитературыпо данной темеи сравнениерезультатов, полученныхв разных опытах.

Глава1. Физиологическаяроль главногокомплексагистосовместимостичеловека

Регуляцияиммунногоответа являетсяодной из основныхфизиологическихфункций организма.Эта функцияпринадлежитгенам главногокомплексагистосовместимостичеловека. Приэтом следуетпринять вовнимание, чтосамо это названиеотражает скорееисторию открытияданной генетическойсистемы, чемее основнуюфункцию. Делов том, что историяоткрытия первыхпродуктов геновглавного комплексагистосовместимостичеловека, называемыхантигенамиHLA(от Humanleucocyteantigens), связана именнос появлениеми развитиемтрансплантационнойиммунологии, когдавозникланеобходимостьподбора тканесовместимыхпар донор иреципиент.Сегодня же мызнаем, что рольсистемы HLAв отторжениитрансплантатаявляется лишьодной из частныхфизиологическихфункций этойсистемы, а основнаяже ее функция— это регуляцияиммунногоответа. В 80-xголах дажедискутировалсявопрос о переименованиисистемы HLАв главный комплексгенов иммунногоответа человека, но учитывая, что староеисторическоеназвание давноукоренилосьсреди иcследователей, решено былоне менять его.

По современнымпредставлениямсистема HLA.обеспечиваярегуляциюиммунногоответа, осуществляеттакие важнейшиефизиологическиефункций, каквзаимодействиевсех иммунокомпетентныхклеток организма, распознаваниесвоих и чужеродных, в том числеизмененныхсобственных, клеток, запуски реализациюиммунногоответа и в целомобеспечиваетвыживаниечеловека каквида в условияхэкзогеннойи эндогеннойагрессии [19].

Все многообразиеуказанныхфункций обеспечиваетсястроениемглавного комплексагистосовместимости.

СистемаHLA, открытая более40 лет назад, по-прежнемуостается однойиз самых сложных, наиболее хорошоизученных ивместе с темзагадочныхгенетическихструктур вгеноме человека.

Представленияо строениисистемы HLA развивалисьи развиваютсяв течение всегопериода ееизучения, однако, за последниегоды произошелкачественныйскачок в развитииэтой проблемы.Раньше, когдаосновным объектомисследованиимогли служитьтолько белки— антигены HLA, представленияо комплексегенов HLA моглиформироватьсяв основном наанализе косвенныхданных, включающихизучение антигеновHLA в популяциях, в семейноманализе, реакциях, субстратомкоторых былиантигены HLA, ит. д. Теперьблагодаряразвитию молекулярнойгенетики ииммунохимиипоявиласьвозможностьне только проводитьтонкий анализантигенов HLA, но и изучитьсами гены HLА.

/>Преждечем перейтик непосредственномуописанию строениигенов HLA, следует отметить, что внедрениев исследованиясистемы HLAмолекулярно-генетическихметодов нетолько позволилоконкретизироватьпредставленияо системе HLA, нои значительнорасширилопредставленияо ее полиморфизме, при этом былиоткрыты многиеновые аллеликлассов I,IIи III, и общее количествотолько известныхспецифичностейHLA классов Iи IIувеличилосьболее чем в 6раз. Аллельныеварианты HLA классовIи IIвходят в несколькогенетическихлокусов, Так, в классе I имеется3 локуса HLA: А, В и С. Такжек антигенамHLA класса относятсягены локусаMIC — МНС class Ichain-related genes (MIC-A и MIC-B).Антигены MICобладают способностьюсвязыватьпептиды и другиекороткие лиганды.В настоящеевремя неясно, являются лиMIС-антигеныболее древнимилибо, напротив, происходятот типичныхантигеновкласса I.

В последнеевремя обнаружено, что антигеныMIC-A участвуютв активациивзаимодействияТсR-молекулыМНС в развитииT-клеточно-опосредованнойцитотоксичиостии активностиНК-клеток, темсамым, в частности, играя роль вобеспечениипротивораковогоиммунитета.

В классеIIосновнымилокусами HLАявляются DR, DQи DP, а также открытыев более позднеевремя DM, LMP и ТАР.Три последнихлокуса обеспечиваюттакие важнейшиефункции, какпроцессииги экспрессияантигенов HLAна поверхностиклеток. КлассIII включает всебя гены, кодирующиефакторы комплемента, фактор некрозаопухолей инекоторыедругие.

Физиологическаяфункция аллелейи кодируемыхими антигеновHLA, относящихсяк различнымклассам HLA, взначительнойстепени различается.Так, антигеныHLA классов Iи IIпринимаютучастие вовзаимодействиимежду иммунокомпетентнымиклетками впроцессе иммунногоответа. Но антигенамкласса Iпринадлежиттакже и физиологическаяфункция обеспечениявзаимодействиямежду всемидругими ядросодержащимиклетками организма, вплоть довзаимодействиянейрон-синапс.Тем самым спомощью системыHLA обеспечиваетсяцелостноефункционированиене только иммуннойсистемы человека, но и организмав целом [19].

Что касаетсяобеспеченияразвития самогоиммунногоответа, то рольантигеновсистемы HLA здесьпервостепенна.Дело в том, чтоименно молекулыантигенов HLAобеспечиваютпрезентацию, т. е. представлениеиммунодоминантныхпептидов, являющихсяпродуктомвнутриклеточногопротеолизачужеродныхантигенов, против которыхи будет индуцирован, а затем и разовьётсяиммунный ответ.Этой функцииантигеновсистемы НLAспособствуетсамо строениеее молекул, которое, несмотряна выраженноеразличие вструктуремолекулы антигеновHLA классов I и II, позволяетобразоватьна внешнем ееконце так называемуюпептидсвязывающуюбороздку, вкоторой иудерживаетсяпредставляемыйдля распознаванияпептид.

Общимдля антигеновклассов Iи II являетсяследующее.Антиген представляющаяклетка осуществляетсвое специфическоевзаимодействие, представляяпептид в контекстесобственнойHLA-молекулы, идентичнойтаковой наклетке, воспринимающейинформацию.Именно за открытиеэтого феномена, названногофеноменомдвойногораспознавания, Цинкернагельи Догерти получилиНобелевскуюпремию. Действительно, этот феноменявился ключевыммоментом ипонимании основфизиологическойрегуляциииммунногоответа. АнтигеныHLA классаII обеспечиваютвзаимодействиеантигенпрезентирующейклетки с Т-хелпером, а антигены HLАкласса I- с Т-эффектором/киллером.Помогают имв этом различныемолекулы корецепторы— CD4 дляТ-хелперов иCD8 для Т-киллеров.Естественно, что различнымявится и эффектэтого взаимодействия.Так, распознаваниепептидов вконтекстемолекулы HLAкласса IIведет к формированиюпопуляции Тх1и Тх2-клеток, одни из которыхиндуцируютразвитие гуморальногоиммунногоответа, а другие, явятся необходимымкомпонентомв индукцииТ-киллеров. Чтоже касаетсяантигеновгистосовместимостикласса I, то Т-киллер, индуцированныйпротив иммунодоминантногопептида, экспрессированногона поверхностиклеток-мишенейв контекстеантигенов HLAкласса I, идентичноготаковым, экспрессированнымна Т-киллере, уничтожит их.

МолекулыМНС класса Iсинтезируютсяв цитозолеклетки, где допоявлениясоответствующегопептида находятсяв связи с такназываемымтирозин-калретикулиновымкомплексом(рис. 1). Послесвязыванияс пептидомпроисходятвысвобождениеи транспортмолекул HLAна поверхностьклеток с участиемкодируемыхМНС «пептидныхнасосов» ТАР(от транспортеров, ассоциированныхс антигеннымпроцессингом).

В 1993 г былопоказано, чтогетеродимерыTAPI и ТАР2 участвуютв окончательнойсборке молекулантигеновкласса I и презентацииими эндогенныхпептидов. Молекулы, кодируемыегеном TAP2, находятся внеравновесномсцеплении сантигенамиHLA-DR и между генамиТАР1 и ТАР2 имеетсявысокая частотарекомбинаций.Установлено, что некоторыемутации в районегенов HLA-TAPведут к потерепрезентирующейфункции антигеновгистосовместимостикласса I. Вполневозможно, чтос нарушениемантигенпрезентирующейфункции TАРможет бытьсвязан высокийуровень ассоциациимежду аллелямигена ТАР1 ипредрасположенностьюк развитиютакого аутоиммунногозаболевания, как инсулинзависимыйсахарный диабет.В го же времяимеется исследованиео том, что одиниз аллелей ТАР1-локуса, а именноR659Q, для которогохарактерендефект транскрипцииРНК, выявляетсяна клеткахмелкоклеточногорака легких.Наконец, имеютсяданные о том, что при синдромеЛуи-Бар, характеризующемсяналичием «голыхТ-лимфоцитов», нарушениеэкспрессииантигенов НLAкласса I связаноименно с гомозиготнымсостояниемаллелей генаТАР2.

В отличиеот молекулыкласса I обецепи молекулыМНС класса IIсинтезируютсяв эндоплазматическомретикулуме, откуда послеих временногосоединенияс третьейинвариантнойцепью онитранспортируютсяв эндоцитарныйкомпартмент, где они иливстречаютсяи затем связываютсяс пептидом, илиже (если этогоне произошло)деградируютв лизосомах(рис. 1). После связис пептидом, заменяющиминвариантнуюцепь, молекулыМНС класса IIпереходят наклеточнуюмембрану. Вытеснениепептидом инвариантнойцепи молекулHLA класса II обеспечиваютбелки, кодируемыетакже системойHLA и названныеHLA-DM. Эти белкикатализируютзамену «временного»пептида инвариантнойцепи на специфическийпептид.

Как указывалосьвыше, в целомсвязь междумолекуламиHLA и пептидамиимеет многообщего дляантигенов HLAклассов I и II.Однако и здесьимеются серьёзныеотличия.

/>Такпептид удерживаетсяв связывающейскладке молекулыHLA класса I какза счет связиего N- и С-концовс определенныммотивом«аллель-специфического»участка МНС, так и за счетсвязи боковыхцепей пептидас боковымикарманамимолекулы МНС.Длины пептидов, связывающихсяс молекулойHLA класса I, — 8—10аминокислот.

/>Пептиды, связывающиесяс молекулойHLA класса II, болеегетерогенны- 9—25 аминокислот.Списывающаябороздка молекулHLА классаII в отличие откласса I«открыта» длясвязыванияс двух сторон, что создаетвозможностьбольшего полиморфизмав связях HLA + пептид.Более того, вмолекуле классаII зоны связываниямогут выходитьдаже за связывающуюскладку. Всеэто дает возможность«аккомодации»более широкогоспектра пептидовк молекуламHLA класса II посравнению стаковыми классаI.

ПереходисследованийHLA на молекулярно-генетическийуровень позволилпо-новому взглянутьна физиологическуюфункцию системыHLA. Так, молекулыМНС приобретаютстабильнуюформу и соответствующуютрехмернуюконфигурациютолько послетого, как всвязывающийсайт ее складкивстраиваетсяпептид. Толькопосле этогомолекула МНСспособна мигрироватьна поверхностьклетки, где онаготова выполнитьсвои функции.Удаление пептидаиз пептидсвязывающейструктуры МНС, экспрессированнойна клеточноймембране, нарушаетее трехмернуюконфигурацию, лишая возможностифункционировать, и ведет к распаду.Комплекс МНС+ пептид являетсячрезвычайностабильным, очищается икристаллизируетсяв единой структуре.Этот комплексостается наповерхностиклетки в течениенесколькихнедель, чтопозволяетмногим «проходящим»Т-клеткам сканироватьпредставляемыйсобственноймолекулой МНСпептид. Наконец, каждый пептидсвязывается(и удерживаетсяв складке) синвариантнымучастком, характернымдля каждогоиз аллелеймолекулы МНСи имеющимопределенныймотив аминокислотныхостатков, участвующийи таком связывании.Таким образом, в связь с конкретнымпептидом вовлекаютсяконкретныеже участкиантигенов —аллельныеварианты молекулМНС, что по сутии являетсяосновой генетическогоконтроля иммунногоответа.

Имеющаясяв настоящеевремя возможностьанализироватьаминокислотныепоследовательностивсех аллельныхвариантовантигенов HLA, включая участки, определяющиеих специфичность, а также структурупептидов, определяющихспецифичностьразличныхчужеродныхагентов, включаяболезнетворные, позволяетзаранее предсказатьсоответствиетех или иныхиммунодоминантныхпептидов темили иным участкаммолекулы МНС.Таким образом, можно заранеепредсказатьгенетическийответ или егоотсутствиена тот или инойагент.

В своюочередь этодаст возможностьне только заранеерешить вопросо том, ответитли данный индивидуумна вакцинациюпротив тогоили иногоболезнетворногоагента, но ипредсказать, насколько этотответ будетфизиологичен, а, следовательно, позволитпрогнозироватьвозможностьразвития рядазаболеванийаутоиммунногогенеза (например, ревматоидныйартрит и инсулинзависимыйсахарный диабет), в генезе которых, возможно, лежиттакже комплементарностьиммунодоминантныхпептидов инфекционныхагентов конкретнымэпитопам аллелейНLА.

Экстремальныйаллельныйполиморфизмсистемы HLA является«мощным механизмомвариабельностии естественногоотбора» человекакак вида и позволяетему противостоятьпостоянноэволюционирующемумножествупатогенов.Доказательствомэтому в историческомплане можетслужить почтиполное вымираниецелых народов(в частности, американскихиндейцев впериод открытияАмерики), обладающих- как мы точнотеперь знаем- весьма низкимпо сравнениюс другими этническимигруппамиполиморфизмомсистемы HLA.

В последниегоды стадоизвестно, чтополиморфизмсистемы HLA. помиморанее установленногомежрасовогои межэтническогоразличия, имееттакже и внутриэтническиеразличия. Следуетотметить, чтомолекулярно-генетическийуровень генотипированияпозволяетсегодня вплотнуюприблизитьсяк пониманиюгенетическиобусловленнойфизиологическойрезистентностичеловека копределеннымзаболеваниямна популяционномуровне.

Генамглавного комплексагистосовместимости, помимо вышеописаннойфизиологическойфункции генетическогоконтроляспецифическогоиммунногоответа, принадлежитещё ряд важнейшихфизиологическихфункций. Описаниюодной из них(генетическомуконтролю качестваиммунногоответа) былапосвященаработа, недавноопубликованнаяв Российскомфизиологическомжурнале им. И.М Сеченова.Речь идет обассоциированномс системой HLAконтроле активностиразличныхсубпопуляцийиммунокомпетентныхклеток, что исвою очередьсущественнымобразом сказываетсяна конечномуровне, т е. накачестве иммунногоответа человека.При этом, естественно, следует помнить, что эта функцияявляется «вторичной»и реализуетсятолько в случае, если организмчеловека генетическиспособен отвечатьна данный агент.Предпосылкойразвития данногонаправленияможно считатьпредположение, выдвинутоеW. Bodmer и J. Bodmer ещев 1978 г. о том, чтона формированиеHLA-профиля европеоиднойпопуляции взначительнойстепени оказаливлияние имевшиеместо в средниевека эпидемиитаких заболеваний, как чума, оспа, холера и т д. Врезультатеэтого средивыживших оказалсязначительныйпроцент людейс определеннымиHLA-генотипами, в первую очередьс генотипомHLA-A1 В8 DR3 [10]. Этот генотип, как предположилW. Bodmer, обеспечиваетболее высокуюрезистентностьк инфекционнымзаболеваниями является насегодняшнийдень генетическиммаркером европеоиднойпопуляции.Следует отметить, что это предположениебыло подтвержденона примеренедавних вспышекбрюшного тифав Суринаме, когда средивыживших европеоидовзначительныйпроцент составилилица с гаплотипомHLA-A1 В8 DR3. Одновременнос этим W. Bodmer высказалсправедливоепредположение, что реализацииэтого эффектамогла бытьсвязана толькос ассоциациямимежду конкретнымиHLA-спецнфичностямии HLA-гаплотипамии иммуннымответом. Учитываятот факт, чтос одними и темиже гаплотипамиHLA оказаласьсвязана устойчивостьк самым различныминфекционнымагентам, логичнобыло предположить, что подобногорода ассоциацияс HLA можетбыть связанане только ссамой генетическиобусловленнойотвечаемостьюк конкретномуинфекционномуагенту, но и стеми звеньямииммунногоответа, которыепринимаютучастие в егореализации, т. е. в конечномэффекте. Именноэто в настоящеевремя и подразумеваетсяпод качествомиммунногоответа.

К настоящемувремени достаточнохорошо известно, что между отдельнымиHLA-специфичностямии HLA-гаплотипамисуществуютположительныеи отрицательныеассоциациис теми или инымипоказателямииммунногостатуса, както количествои функциональнаяактивностьклеток CD4+ CD8+, ЕКК, фагоцитирующейфункции нейтрофилови т. д. Следует, однако, отметить, что абсолютноечисло работв этом направленииранее выполнялосьпри изучениикавказоиднойпопуляции.

В последниегоды удалосьпоказать, чтоассоциированныес HLA показателииммунногостатуса могутразличатьсяа разных этническихгруппах. Примеромэтого можетбыть исследованиеассоциациймежду отдельнымипараметрамииммунногостатуса иHLA-специфичностямив двух этническихгруппах — русские(кавказоиды), буряты (ориенты).

Следуетотметить, чтоисследованиеданной физиологическойфункции системыНLA, несмотряна то что оностало развиватьсяотносительнонедавно, являетсявесьма перспективнымкак в фундаментальномаспекте — вплане установлениямолекулярныхмеханизмовуказанныхассоциаций, так и в практическом, поскольку этонаправлениеимеет значениев плане прогнозавозможностинеблагоприятныхвоздействий(в том числетехногенных)окружающейсреды на представителенразличныхэтническихгрупп [19].

Глава2. Ассоциациятуберкулёзас различнымигенетическимифакторами

Туберкулезвызываетсямикобактериямитуберкулеза, медленно растущимикислотоустойчивымибациллами.Воскоподобнаяклеточнаястенка микобактерий, которая состоитиз несколькихгликолипидов, таких каклипоарбиноманнани фосфоинозитолманнозиди длинной цепочкижирных кислот(50-80 атомов углерода)ответственныза медленныйрост, кислотоустойчивость, устойчивостько многим обычнымантибиотиками дезинфектантам.Отдельныевирулентныефакторы не былиописаны, но этоможет измениться, так как недавнобыл расшифровангеном микобактерийтуберкулеза.Вдобавок, усилиядолжны бытьнаправленына определениефункциональнойнагрузки геномаи белков Mycobacteriumtuberculosis. Это связанос тем, что срочнонеобходимавакцина лучшая, чем ВЦЖ с еёнизкой эффективностью.Данная вакцинадолжна достигнутьсильногоцитотоксическогои воспалительногоТ-клеточногоответа дляуничтожениятуберкулезныхбацилл.

Пониманиеважной ролигенетическихфакторов вразвитии туберкулезапришло в первуюочередь изэпидемиологическихи близнецовыхисследований.Так, в несколькихработах былопоказано, чтостепень устойчивостик M. tuberculosisу человекакоррелируетсяс регионом егопроисхождения– предки болеепредрасположенныхк заболеваниюиндивидов чащевсего происходилиз областей, где туберкулезне распространен.Кроме того, частота клиническоготуберкулезаособенно высокаво время эпидемийв популяциях, ранее не встречавшихсяс данной инфекцией, в частности, у американскихи канадскихиндейцев.

Опубликованыисследованиягенов, ответственныхза предрасположенностьк туберкулезуу человека.Так, у жителейКамбоджи былапоказана ассоциацияаллеля HLA-DQB1*0503II с заболеванием.Во многих популяцияхпредрасположенностьк проказеассоциированас HLA-DQB2.С проказойассоциировантакже полиморфизмв области промоторагена TNFA.

Показано, что с туберкулезомсвязаны триточечные заменыв гене белка, связывающегоманнозу (MBL).Причем частотаэтих вариантовбыла достаточновысока как уевропеоидов, так и у африканцеви австралийскихаборигенов.

В последнеевремя полученыдоказательствасвязи туберкулезас полиморфизмомгена рецепторак витамину D(VDR). Показаныассоциациис туберкулезомполиморфизмагенов, кодирующихинтерлейкин-1β(ILIB) и егорецепторныйантагонист(ILIRA). Ведутсяисследованиятакже и другихгенов, рассматриваемыхкак кандидатына роль геновпредрасположенностик туберкулезу, исходя из ихфункции (NOS2,TLR, NAT2, GST)[1].

Вместе с темсуществуютчеткие причинно-следственныеотношения междуредкими менделирующимииммунодефицитамипо Т-клеткамили фагоцитами тяжелымиформами туберкулеза.Пациенты стакими заболеваниямив значительнойстепени чувствительнык инфекции нетолько M.Tuberculosis, но идругими микроорганизмами.

На основанииимеющихся насегодняшнийдень данныхсформулированопредрасположениео непрерывномспектре генетическогоконтроляпредрасположенностик туберкулезуу человека: моногенныеформы – вариантыс эффектомглавного гена(олигогенныеформы) – полигеннаяподверженность.Прогресс вмолекулярно-генетическихисследованияхпредрасположенностик заболеваниюбудет, вероятно, возможен толькопри комплексноманализе. Возможно, на всех уровняхгенетическогоконтроля участвуетодин ген, имеющийредкие мутации, ответственныеза менделирующиетяжелые фенотипы, относительноредкие варианты, обусловливающиеосновной эффект, и распространенныев популяцияхполиморфизмы, в умереннойстепени определяющиериск развитиязаболевания[8].

Поиск такогогена (генов) –на сегодняшнийдень актуальнаязадача. Крометого, важнымпредставляетсяизучениефункциональногополиморфизмаизвестныхгенов-кандидатовтуберкулезав популяцияхразличногоэтническогосостава с разнойчастотой заболевания.

Глава 3. Персистентныебактериальныеинфекции: интерфейспатогена ииммунная системахозяина

Персистентныебактериальныеинфекции включаютв себя M.tuberculosis, Salmonellaenterica и др., которыеявляются значительнойпроблемой дляздоровья населения.Увеличиваетсяколичестволекарственно-устойчивыхштаммов M.tuberculosis и S.typhi. M.tuberculosis и S.typhi вызываютзаболевания, часто ассоциированныес HIV инфекцией.

Когда патогенныймикроорганизмвпервые инфицируетсвоего хозяина, обычно происходитдраматическаяактивацияврожденногои адаптивногоиммунногоответов, чтоприводит кпроявлениюсимптомовболезней. Адаптивнаяиммунная системахозяина обычноочищает организмот внедрившегосяпатогенна. Хотянекоторыепатогенныебактерии способныподдерживатьинфекционныйпроцесс умлекопитающихдаже при развитиивоспаления, специфическихантимикробныхмеханизмови сильногоадаптивногоиммунногоответа; в дальнейшемразвиваетсяперсистентнаяинфекция.Микобактериитуберкулезавызывают длительнуюинфекцию имогут служитьпричиной острыхили хроническихзаболеваний; они также могутбессмысленноперсистироватьи реактивироватьсяв дальнейшем[3].

Персистентнаяколонизациябактериямипроисходитбез видимыхклиническихпроявлений.Хотя даже приотсутствииклиническихсимптомовинфекция несетнекоторый рискдля хозяина.Индивиды, зараженныемикобактериямитуберкулеза, рискуют приреактивациипатогенназаразитьсяактивной формойтуберкулеза, которая опаснадля жизни. Длительнаяперсистенциябактерий впривилегированнойнише хозяина– макрофагальнойвакуоли – вызываетнесколькофундаментальныхбиологическихвопросов. Например, каков репликативныйи метаболическийстатус бактерииво время бессимптомнойперсистенции, и как им такдолго удаетсяизбежать действияиммунногоответа хозяина.Сейчас начинаютпониматьбактериальныеи факторы хозяина, которые вовлеченыво взаимодействиепатоген-хозяинв течениеперсистирующейинфекции.

Возможностьвызыватьперсистирующиеинфекции –фундаментальныйаспект взаимодействиямежду многимиразличнымивирусными, бактериальнымипатогенамии их хозяином-млекопитающим.

3.1 Персистентныемикобактериальныеинфекции

Патогенныемикобактериивызывают некоторыедлительныеинфекционныезаболеванияу их хозяев. M.Tuberculosis вызываюттуберкулез, одно из самыхдревних известныхчеловеческихзаболеваний, этими бактериямипо различнымоценкам инфицированатреть населенияЗемли. Первоначальноезаражениемикобактериямиведет к репликацииинициальногосайта инфекциив легких. Этосопровождаетсябацилемией, во время которойнаибольшеечисло бактерийрассеиваютсяв нелегочныхорганах –региональныхлимфатическихузлах. МигрируютM. Tuberculosisвнутри ДК. Адаптивныйиммунный ответи ограничениебактериальногороста происходитпосле их диссеминации, чему способствуетдоставка бактерийв лимфоидныеорганы. У многихинфекционныйпроцесс заканчиваетсяпосле инициацииадаптивногоиммунногоответа. Хотяу некоторыхорганизм никогдаполностью неочищается отпатогена. Приперсистентномзаражении людимогут статьносителямина многие годыи даже в течениевсей жизни.Существуетриск, что бессимптомнаяинфекция перейдетв высококонтагиозный, клиническиактивный ипотенциальноопасный дляжизни болезненныйстатус, известныйкак реактивациятуберкулеза.Риск переходав клиническиактивную формуочень великпосле инициацииинфекции, частоэто происходиту иммунологическикомпромиссныхиндивидов(новорожденных, людей старческоговозраста иинфицированныхВИЧ).

3.2 Выживаниемикобактерий

Персистирующиемикобактериинаходятся вгранулемах.Хотя точнаялокализацияживых патентныхмикобактерийво время персистированияостается спорной.Бактерии частонаходят в макрофагахвнутри гранулем, которые формируютсяв ответ наперсистенциювнутриклеточныхпатогенов (рис.2). Туберкулезныегранулемычеловека имышей состоятиз организованнойколлекциимакрофагов, Т-лимфоцитов, некоторыхВ-лимфоцитов, дендритныхклеток, фибробластов.Считается, чтогранулемыначинаютсяс агрегациеймононуклеарныхфагоцитов, которые окружаютиндивидуальныеинфицированныемакрофаги.Данные макрофагистановятсяактивированнымии в некоторыхслучаях макрофагисливаются вгигантскиеклетки, которыетакже формируютсяв ответ на другиеперсистирующиеинфекции, вчастности, вирусные. Т-лимфоцитыи другие иммунныеклетки такжеучаствуют впроцессе образованиягранулемы.Развивающеесяпоражениезакрываетсяокружающимиэпителиальнымитканями, которыеимеют плотныеинтердигитированныеклеточныемембраны, формирующиеоболочку, похожуюна молнию исоединяющуюсоседние клетки.В центре гранулемыобычно находитсяочаг казеозногонекроза – участокклеточныхосколков. Какмикобактериивыживают внутриданного пораженияв течение многихлет? Одна изгипотез гласит, что персистентныебактерии находятсяв нерепликативнойстадии илиимеют низкийуровень репликациив центре казеозногоочага. Доказательствотого, что у человекаперсистентныебактерии вдремлющемсостоянии, врезультатахкультурированияи окрашиванияпораженныхтканей пациентов, подвергшихсяхимиотерапии.Это, возможно, является ошибкойпри культивировании.Альтернативнаягипотеза того, как постоянныйбактериальныйгруз поддерживается, состоит в том, что существуетбаланс междубактериальнойрепликациейи действиемиммунной системы.

3.3 Выживаниевнутри макрофагов

Патогенныемикробактерииинициируютдлительнуюинфекцию, внедряясьв макрофагии предотвращаянормальноесозреваниефагосом. Возможностьмикобактерийреплицироватьсяи/или выживатьв макрофагахиграет существеннуюроль в персистенцииin vivo. Эточерта, с помощьюкоторой различаютпатогенныеи непатогенныештаммы.

Инфицированныемакрофагистановятсяглавными резервуарамимикобактерий.Были описаныслучаи распространенияпатогеннавнутри макрофагов.Микобактериивмешиваютсяв созреваниефагосом, блокируяслияние образовавшихсяфагосом с эндосомамии лизосомамии изменяя мембранныепротеины, которыев норме способствуютобразованиюфаголизосом.Также у патогенныхмикобактерийвыработалсямеханизм, которыйпозволяет имперсистироватьв макрофагальныхфаголизосомах.Исследованияпоказали, чтовнутри гранулемлягушки ≈ 60 %интактныхбактерий видаМ.marinum, которыеблизки к M.tuberculosis. Уровеньфаголизосомальногослияния коррелируетс уровнеммакрофагальнойактивации.Микобактерииимеют два механизмаадаптации кинтрамакрофагальномувыживанию: ограничениефаголизосомальногослияния илиадаптация кфаголизосомальнымусловиям.

В последнихпубликацияхсказано, чтомикобактерииимеют временныеи иммунно-опосредованныеразличия вгенной экспрессиив активированныхin vitro ив макрофагах, изолированныхот инфицированныхтканей. Последниеисследованияпоказали различныевыживаниямикобактерийв типе 1 (ИЛ23-продуцирующие)и типе 2 (ИЛ10-продуцирующие)макрофагов.Иммунный статусмакрофаговимеет важнуюроль в персистенциимикобактерий.ИФНγ– критическийкомпонентиммунитетапри туберкулезе, он активируетинфицированныемакрофаги, чтоприводит кингибированиюрепликациимикобактерий.Важность данноймолекулы вконтролемикобактериальныхинфекций доказываетсяоткрытиемИФНγ-связанныхгенетическихмутаций, прикоторых появляетсяпредрасположенностьк туберкулезу.ИФНγиндуцируетэкспрессиюNO-синтетазы2 (NOS2) и недавноидентифицированногоNOS2-независимого,47 кДа гуанозин-3-фосфатпротеина LRG-47; оба пути важныв контролеинтрацеллюлярнойрепликациимикобактерий.Хотя частьбактерий всёравно способнавыживать вмакрофагах, возможно, благодарямеханизмамингибированияSTAT-1 опосредованногоИФНγтранскрипционногоответа и/илисупрессиисекреции ИЛ12– провоспалительногоцитокина, которыйспособствуетусилению продукцииИФНγ[5].

3.4 Иммунныйответ на персистирующиемикобактерии

Пока малоизвестно обиммунных механизмах, которые вовлеченыв ответ противперсистирующихмикобактерий.В последнихработах сиспользованиемметодов молекулярныхотпечатковбыло показаноповторноезаражениеиммуннокомпетентныхлюдей новымиштаммами M.Tuberculosis. Этодоказывает, что иммунитетк туберкулезуможет бытьнеполным и чтоповторноезаражениеиграет немаловажнуюроль.

Роль адаптивногоиммунногоответа приперсистенциимикобактерийочень важна.Есть некоторыесвидетельства, что CD8+Т-клетки секретируютбольшую частьИФНγ.Во время остройфазы болезнибольшую частьИФНγпродуцируетCD4+ Т-клетки, доказываяразличнуюактивациюТ-лимфоцитовв эти фазыинфекционногопроцесса. Вдополнениек продукцииИФНγактивные CD8+Т-клетки контролируютперсистентныеинфекции.

Продукцияиммунносупрессорныхцитокинов, таких ИЛ10 и ТФРβ, была описанау людей с активнымтуберкулезоми повышениепродукции ИЛ10в легких у мышейс хроническоймикобактериальнойинфекцией. Этосвидетельствуето том, что ИЛ10может способствоватьреактивациихроническоготуберкулеза.

Глава 4. CD-1и CD-1-рестриктированныеТ-клетки приинфекциях, вызванныхвнутриклеточнымибактериями

Гликолипид-специфичные,CD-1a-, b-,c- зависимыецитотоксическиеТ-клетки вовлеченыв ответ организмапротив туберкулеза(рис. 3). МолекулыCD-1 презентуютмикобактериальныегликолипидыиз различныхвнутриклеточныхучастков зараженнойклетки. Во времямикробнойинфекцииCD-1d-зависимыенатуральныекиллеры быстропродуцируютцитокины ивыполняютрегуляторнуюфункцию [23].

Участиеглавного комплексагистосовместимости(МНС) в Т-клеточномответе былопоказано навирусных системах, но его важностьв бактериальныхинфекциях ив ответе противпростейшихбесспорно.МНС-II-рестрикрированныеCD8+ Т-клеткииграют важнуюроль в защитеорганизмапротив бактерийи простейших, тогда какМНС-I-рестриктированныеCD8+ Т-клеткиважны в случаяхвирусных инфекций.Первые Т-клеточныепопуляциивыполняютхэлпернуюфункцию, выделяютсяцитокины дляактивациимакрофагови/или В-клеток, тогда какпоследующие, главным образом, действуют, убивая зараженныеклетки хозяина.Во время некоторыхбактериальныхинфекций вместес обычными CD4+и CD8+ Т-клеткамитакже естьнеобычныеТ-клетки длясодействияв достиженииустойчивости: это Тγδ-лимфоциты, которые распознаютфосфолипидыи Тαβ-лимфоциты, которые контролируютсянеклассическимиМНС и МНС-похожимимолекулами.Т-клетки, контролируемыеCD-1 молекуламии противодействующиебактериальнымгликолипидам, также являютсянеобычнымиТ-клетками.

4.1 Атигенпрезентующиемолекулы

В цитоплазмебелки разрушаютсяпротеазами.Образовавшиесяпептиды затемтрансформируютсяв эндоплазматическомретикулумеспециальнымитранспортнымимолекуламитак называемымитранспортерамипереработанногоантигена (ТАР).В эндоплазматическомретикулумеэти пептидызатем обрезаютсядля упаковкив щель, сформированнуюпервым и вторымдоменом тяжелойцепи МНС-I.После ассоциациис β2микроглобулином(β2m), комплекс МНС-I-β2mтранспортируетсяна клеточнуюповерхность, где презентуетпептиды дляCD8+ Т-клеток.Молекула МНС-IIсостоит из двухтяжелых цепей:α-цепьи β-цепь, первые доменыобоих цепейобразуют щель, в которую загружаетсяпептид в позднихэндосомально-лизомальныхотделах. Пептиды, которые презентуютсямолекуламиМНС-II, образуютсяв эндосомально-лизомальнойсистеме поддействиемпротеаз (такихкак аспарагинилпептидаза, катепсины).Благодарябольшому полиморфизмумолекул МНС, каждая обладаетуникальнымгаплотипом.Это гарантируетто, что огромноемножествоантигенныхпептидов будетпрезентованои исключаетвозможность, что какой-топатоген избежитраспознаванияТ-клетками.Различныеантигенныепептиды выбираютсяразными видамиМНС. В противоположностьклассическиммолекулам МНСнеклассическиеМНС-Ib и CD-1не обладаютполиморфизмом.Поэтому антигенныелиганды, презентуемыеданными молекуламиТ-клеткам, должныбыть болееустойчивыми[24].

До недавнеговремени считалось, что Т-клеткиоказываютвлияние напептидныйантиген, тогдакак В-клеткимогут распознаватьпротеины сахара, гликолипиды, нуклеиновыекислоты и другиевиды антигенов.Эта теория былаподвергнутасомнению, когдаобнаружили, что CD-1 молекулыпрезентуютгликолипидныеантигены Т-клеткам(рис. 4). Есть двавида молекулCD-1 CD-1a,CD-1b CD-1cиз первой группы,CD-1d извторой группы.Обе группыпрезентуютантиген вчеловеческоморганизме ив организменекоторыхмлекопитающих, таких как кролик.У мыши антигенпрезентуюттолько молекулыСD-1 из второйгруппы. CD-1молекулы похожина молекулыМНС-I тем, что они состоятиз α-цепочки, включающейтри домена, которые нековалентносвязаны с β2m.Анализ кристаллическойструктуры CD-1dпоказал, чтоα-цепочкаформирует щельмежду первыми вторым доменами, которая ужеи глубже, чему молекул МНС1-го класса. CD-1антиген-связывающаящель не способнаформироватьводородныесвязи с пептиднымантигеном какэто делаетмолекула МНС1-го класса, нохорошо подходитдля гидрофобноговзаимодействия.В добавок ккортикальнымтимоцитам, группа IСD-1 молекулпервая экспрессируетсяв дендритныхклетках (ДК), которые являютсяважнейшимиантигенпрезентующими(АПК) для Т-клеток.Группа IICD1 молекулнаоборот, восновном находитсяна эпителиальныхклетках, кортикальныхтимоцитах игепатоцитах, но они тожемогут бытьэкспрессированына АПК таких, как ДК, макрофагахи β-клетках.При микобактериальнойинфекции invitro возрастаетэкспрессияCD1d молекулна поверхностимышиных ДК имакрофагов[23].

4.2 Презентациямикобактериальныхлипидов группойI CD1 молекул

Исследования, проведенныеПорцелли, Бреннер, Кроненберги Модлин доказали, что CD1a,CD1b, CD1cмолекулы презентуютмикобактериальныегликолипидыклеточнойстенки. Микобактерииобладают клеточнойстенкой, богатойгликолипидами, что очень важнодля их устойчивости.Было доказано, что CD1 молекулыпервой группыпрезентуютна Тαβ-клеткахгликолипидыфосфоиннозитолманнозиды(PIM), липоарабиноманнан,(LAM) миколовыекислоты игексозо-1-фосфоизопреноиды.Не было идентифицированони одногобактериальногоантигена, презентуемогоCD1 молекуламивторой группы.

CD1d-рестриктированныеклетки имеютуникальныйфенотип. Ониэкспрессируютна поверхностиCD3 комплекстакже хорошо, как и маркерыдля NK, NK1-клеток.Более того, ониэкспрессируютвысоко специфичныйТКР репертуар, включающийVα14Jα281комбинациюу мыши и гомологичнуюVα24JαQу человека.Поэтому считается, что NK Т-клеткипохожи. Этотфакт такжеподтверждаетсятем, что ониреагируют сαGalCer.

4.3 ВнутриклеточнаялокализацияCD1 молекул

Фагоцитированныймакрофагамибактериальныйпатоген попадаетв фагосому, которая затемпроходит черезнесколькостадий. Главныешаги, которыепроходит фагосома:

1.Ранняяэндосомальнаястадия, на которойфагосома сближаетсяи трансферрином.

2.Поздняяэндосомальнаястадия, на которойфагосома закисляетсядо оптимальнойдля лизосомальныхферментов pH.

3.Фагосома, в которой идетвнутриклеточноке«пищеварение».

Микобактериимешают созреваниюфагосом, хотямеханизм этогопока еще неизвестен.Микобактериальныефагосомы недо конца закислены, но бактерииполучают доступк трансферрину, который являетсяглавным депожелеза не толькодля клетокхозяина, но идля микобактерий.Трансферрини его рецептордвигаются вдольранней переработаннойэндосомы, отдаетготовое железои затем возвращаетсяна клеточнуюповерхность.Показано, чтомикобактериальныегликолипидыв самом деленагружаютсяна CD1 молекулыв течениимикобактериальнойинфекции, этимолекулы могутбыть найденыв компартментах.ВнутриклеточнаялокализацияCD1 молекули микобактерий, покрывающихих была анализированас помощью конфокуснойсканирующейлазерной микроскопиидендритныхклеток зараженногочеловека. Прииспользованииразличныхвнутриклеточныхмеркеров былонайдено, чтотри CD1 молекулыпервой группылокализованыв клетки по-разному.CD1а молекулапо распределениюпохожа на МНСпервого классаи точно такжеэкспрессированана клеточнойповерхности.Кроме того,CD1а молекулабыла локализованана раннихрециклирующихэндосомахположительныхдля GT-PaseARF6 и для гранулБирбека клетокЛангерганса.CD1b и CD1cмолекулы былинайдены в позднихэндосомально-лизосомальныхвезикулах.Данные компартментытакже служаткак «доки» дляразгрузкипептидов в МНСмолекулы второгокласса. ВпротивопоставлениеCD1b, CD1смолекула обильнопрезентуетсяна плазматическоймембране и вTf-лабильныхранних эндосомах.Кроме того, было найдено, что многочисленныегликолипиды, включая LAMи PIM, отщепляютсяот микобактерийвнутри фагосоми транспортируютсяиз фагосомыв поздние эндосомыи лизосомы.CD1b и CD1смолекулы былитакже обнаруженыв этих компартментах.CD1с молекулымогут такжевзаимодействоватьс микобактериальнымигликолипидами, потому что взараженныхклетках онибыли обнаруженыв микобактериальныхфагосомах, задержанныхна ранней стадииактивации [24].

CD1bмолекулы былипервоначальнонайдены в зрелыхфаголизосомах.Как ранее былопоказано, созреваниефагосом сопровождаетсяпотерей жизнеспособностимикобактериями, поэтому этифаголизосомыскорее всегосостоят изнежизнеспособныхмикобактерий.Дальнейшиеэкспериментыпоказали, чтозараженныеклетки хозяинаотщепляютгликолипиды, которые могутбыть поглощеныдендритнымиклетками, лежащимив их окрестности.Данные открытияобъясняюттранспортантигенныхгликолипидовиз макрофаговв ДК, или из главныххозяйскихклеток к главнымАПК, экспрессирующимCD1 молекулы, в экспериментеin vitro.Предварительныеданные свидетельствуют, что внутриклеточныевезикулы различныхразмеров, такиекак экзосомыи апоптическиепузырьки, принимаютучастие в данномтранспорте.Во время микобактериальнойинфекции экспрессияна поверхностимолекул МНСпервого и второгокласса и CD1bнерегулируема.

4.4 Рецептордля транспортаАГ

Маннозо-мембраныерецепторы (PPR)играют рольв понимании(распознавании)и презентацииочищенногоLAM с помощьюCD1b. ЭтотR был идентифицированв ранних эндосомах, но не в микобактериальныхфагосомах, чтодоказываетего участиев распознаваниичистых гликолипидов.РРR CD14связывает нетолько липополисахаридыграм "-" бактерий, но также некоторыемикобактериальныегликолипиды.Этот R путешествуетчерез фагосомыи поздниеэндосомы-лизосомызараженныхмикобактериямимакрофагов.Отсюда следует, что CD14 можетприниматьучастие в транспортегликолипидовиз фагосом вдругие внутриклеточныекомпартменты.Так как CD14экспрессируетсятолько на макрофагах, то дендритныеклетки, несущиеCD1 молекулу, должны использоватьдругие R, для транспортагликолипида.Предполагается, что гликолипидытранспортируютсяиз зараженныхмакрофаговв незараженныеДК для презентации, а также, чтоCD14 можетприниматьучастие втранслокацияхгликолипидавнутри макрофага.Как было показанодля LAM, гликолипидымогут встраиватьсяв мембранухозяйскойклетки и мигрироватьвдоль фосфолипидногобислоя. В фагосомахCD1 можетприниматьгликолипидыиз депо. Здесьзагрузка CD1аи CD1с (но неCD1b) независимаот низкого рH.Расщепленныемикобактериальныегликолипидымогут быстросвязыватьсяс экспрессированнымина клеточнойповерхностимолекуламиCD1 с помощьюмеханизмаэкстрацеллюлярнойзагрузки – этотпроцесс постулировандля CD1а и, возможно, CD1с.

Считается, что загружающиегликолипидыв CD1 молекулымогут включатьшаперон-подобныемолекулы дляоблегчениясвязыванияполовины гидрофобноголипида с гидрофильнойантиген-связывающейщелью. Такжеисследуется, какие микобактериальныегликолипидынуждаются впереработкедо того, какони будут связаныи презентованымолекуламиCD1. было показано, что презентациягликолипидамолекуламиCD1b (ноне CD1а) включаетв себя транспортгликолипидовв лизосомальныекомпартменты.Более того, эндосомальнопутешествующиеCD1b, CD1си CD1в молекулысодержат YXXZэндосомально-целевуюпоследовательность(Z содержитбольшую гидрофобнуючасть цепочки).Этот целевоймотив помогаетассоциацииCD1 молекулс адапторнымпротеином (АР)их корректнойвнутриклеточнойсортировке.При мутацииданной последовательностиотменяетсяпрезентацияантигена молекулойCD1b. Кислаясреда внутрилизосом можетоблегчитьрасщеплениеантиген – связывающийщели CD1 иобрезаниюгликолипидовлизосомальнымигликозидазамии липазами.Действительно, при проведенииэкспериментовс меченнымирадиоактивнымиатомами микобактериямибыло доказано, что микобактериальныегликолипидыферментативноизменяютсяна их пути изфагосом.

Антиген-связывающаящель CD1 молекул, возможно, связываетдве гидрофобныецепочки жирныхкислот гликолипидов, тогда какгидрофильнаяуглеводнаячасть высовываетсядля распознаванияТ-клетками(рис. 4). Ферментативнаямодификацияуглеводнойчасти можетпривести кдифференциацииТ-клеточныхэпитопов и, следовательно, к антигеннойспецифичности, несмотря нато, что CD1молекулынеполиморфны.Ферментативнаямодификацияжирных кислотможет улучшитьаккомодациюгликолипидовв щели CD1молекул [23].

4.5 CD1dи NКТ-клеткипри инфекциях

Знания о роливторой группыCD1 молекули NКТ-клетокв антибактериальномответе хозяинаещё ограничены.NКТ-клеткинаходятсяпервоначальнов печени, гдеони продуцируютIL4 в ответна лиганд ТКR.СтимуляцияNКТ-клетокαGalCerиндуцируетсинтез ИЛ4 иИФНγ, в результатеиммунный ответсклоняетсяв сторону Тх2-типа.При инфекции, вызваннойMycobacteriym bovis,Bacille-CalmetteGuerrin начальныйинтерлейкиновыйвзрыв NКТ-клетокмодулируетпродукцию ИФНγ.Это, возможно, достигаетсяза счет индуцированногоВСG выделенияИЛ12. В самом деле, при выделенииобоих цитокиновпроисходитсдвиг в сторонупродукции ИФНγ.Введение анти-CD1моноклональныхантител приводитк незначительномуулучшениютечения листериоза.Параллельноувеличиваетсясекреция ИФНγ, ИЛ17 и ТНФ, а секрецияТНФβсильно снижается.Позже показанапрактическаяроль ТНФβв иммуннойрегуляцииNКТ-клетками.Такое же анти-CD1введение слегкаусиливаеттуберкулезу мышей и снижаетпродукцию ИФНγ, ИЛ12 и ТНФ. Согласуетсяс этим то, чтоNКТ-клетки, контролируемыеCD1, принимаютучастие вформированиигранулемы, индуцируемоймикобактериальнымигликолипидами, в частностиРIМ. CD1Knock out мыши, зараженныеM. tuberculosis, не страдаютот развивающегосятуберкулезапо сравнениюс диким типоммышей. Это различиеможет бытьобъясненочрезмерностьюиммунной системы, что способствуеткомпенсациифункций NKТ-клетокдругими клеткамиу CD1 КО мышей.Или, возможно, что введениеанти-СD1dАТ не толькоблокируетузнавание СD1клетками NK, но также и заражениеАПК. Интересентот факт, чтореагирующиеклетки черезCD1d и CD1cмогут влиятьна кальциевыйнаплыв в Т-клеточнуюлинию, экспрессирующуюСD1.

Регуляторнуюроль NКТ-клетоклучше всегодемонстрируетсяна их роли вЛПС-индуцированнойреакции. Считается, что даннаяпродукция ИФНγявляется движущейсилой ЛПС-индуцированноголетальногошока.

Хотя считалось, что быстраяпродукция ИФНγпроисходитNКT-клетками, но, возможно, что резидентныепеченочныеNКТ-клеткиявляются источникомИФНγпри ЛПС-индуцированнойпеченочнойпатологии. Былопоказано, чторезидентныепеченочныеNКТ-клетки, ответственныеза гепатотоксичность, активируютсяИЛ-12, котораявыделяетсяЛПС-стимулированнымиКупферовскимиклетками. ИстощениеNКТ-клетоквозрастаетпри сопротивлениинакоплениюИЛ-12 (ЛПС-индуцированнаягенерализованнаяреакция Шварумана).CD7 КО мышис дефектом впродукции ИФНγи сокращениемчисла резидентныхпеченочныхNКТ-клетокустойчивы кЛПС-индуцированномушоку. ПорогактивацииNКТ-клетокбактериальнымипродуктаминизок, поэтомувозникает рискострой и тяжелойпатологии, которая требуетконтррегуляцииигибиторнымицитокинами, такими какИЛ-10 или ТФРβ.Такая чувствительностьпозволяетNКТ-клеткамбыстро отвечатьна проникновениемикроорганизма, но несет рисквозникновениячрезмернойреакции, приносящейвред хозяину.Интересно, чтоактивация иэкспансияNКТ-клетокне вызваналегким попаданиембактериальнойфлоры. Незараженныемыши содержатто же числоNКТ-клеток, что их обычновыведенныесородичи.CD1а-,CD1b- иCD1с-зависимыеТ-клетки убиваютзараженныеклетки – мишениперфорин-зависимымспособом.

Они выделяютмикробициднуюмолекулу, вместес NKT-клеткамигранулизин, которая способнаубивать микобактериитакже хорошо, как и другиепатогенныебактерии, грибыи паразиты.Гранулизинне может добратьсядо патогенна, расположенногов фагосомах, поэтому зависитот кооперациис перфорином.

Открытие, что Т-клеткираспознаютлипиды и гликолипиды, презентуемыеCD1 белками, сильно расширилочисло потенциальныхмикробныхантигенов, преследуемыхиммунной системойво время инфекции.СпособностьCD1d иNКТ-клетокактивироватьврожденныйи адаптированныйиммунные ответыпривела к идее, что эти клеткимогут модулироватьустойчивостьк инфекционнымагентам. В добавок,CD1d NКТ-клеткимогут непосредственновнести вкладв резистентностьхозяина, таккак они выделяютмножествоэффекторныхмолекул, которыемогут воздействоватьна антимикробныйэффект. Хотямногое былоизучено о CD1dNКТ-клеткахпри использованиисинтетическогоАГ α-галактозинцерамида(αGalCer), остается область, недостаточноизученная, офизиологиисобственныхи микробныхантигенов, которые могутбыть презентованыс помощью CD1d[24].

4.6 αGalCerспецифическиактивируетCD1diNКТ-клетками

СложныйαGalCer– синтетическийгликолипид, основанныйна связанныхлипидах, очищенныхиз морскойгубки, которойиндуцировалирегрессиюопухоли. Танигичии др. показали, что антиопухолевыйэффект αGalCerзависит отiNКТ-клеток, что α-гликозилцерамидпрезентуетсяCD1d. УзнаваниеαGalCer- общая чертадля мышиныхи человеческихiNКТ-клеток.αGalCerсвязываетсяс очищеннымCD1d белкомв бесклеточныхсистемах, врезультатеαGalCer/CD1dкомплекс можетактивироватьiNКТ клеточныегибридомы. Хотяих структуранапоминаеттаковую издругих CD1-презентуемыхантигенов,α-гликозилцерамидне продуцируетсяклеткамимлекопитающихили патогенныхмикробов. Несмотряна это возможностьактивироватьiNКТ-клеткисделала αGalCerнеобходимымреагентом дляизучения iNКТ.

In vivoприем αGalCerимеет глубокиеиммунологическиепоследствия, которые опосредованыCD1diNКТ-клетками;αGalCer-зависимаямодуляцияиммунногоответа не происходиту мышей, которыеиспытываютнедостатокCD1d илиiNКТ-клеток.Этот эффектвключает активациюNК, В-клетоки Т-клеток впределах 3-24 часов, которые детерминируютсяиндукциейранних маркерныхклеток активации, таких как CD69(В, Т и NК), CD80и CD86 (В-клеток).Например, послевведения αGalCeriNКТ-клеткиактивируютNК к продукцииИФНγ.αGalCerактивированныеiNКТ-клеткиингибируютдифференцировкуТх2. РаспознаваниеiNКТ-клеткамиαGalCer, презентуемогоДК, ведет кCD40/CD40L-зависимойпродукции ИЛ12дендритнымиклетками. Такимобразом, подвлиянием iNКТ-клетокДК созревают.Напротив, продукцияИЛ4 iNКТ-клеткамизависит отИЛ12. Таким образом, сложные взаимодействияи регулирующиесети обратнойсвязи междуАПК и iNКТ-клеткамимогут определятьразвитие иммунногоответа по Тх1или Тх2-типу.

Вдобавокк этому эффектуна иммунныйответ, αGalCerоказываетвлияние iNКТ-клеткинепосредственно.В противоположностьобычным Т-клеткам, распространенияiNКТ-клетокбыли обнаруженыпосле активации.Фактическипосле стимуляциианти-CD3моноклональнымиантителамиили αGalCerтяжело обнаружитьiNКТ-клетки, потому что ониподвергаютсяапоптозу [25].

Глава 5. Отличительныечастоты генотипацитокинов средиканадскихаборигенови кавказскихпопуляций

Генетическоеразнообразие, связанное счеловеческимиммунным ответом,- ключевой факторвыживанияиндивидуумови популяцийв историичеловечества.Разнообразиепопуляций ввосприимчивостик болезням исопротивлениибыло идентифицированои связано сразличиямив цитокине mRNAи уровнях экспрессиибелков. Полиморфизмыв регуляторныхобластях геновцитокинов могутвлиять на уровнитранскрипциигенов. Они былиассоциированыс восприимчивостьюк аутоиммуннымзаболеваниям, таким какревматоидныйартрит, менингити сепсис. Канадскиеаборигены имеютболее высокуючастоту полиморфизмацитокинов, чтоблагоприятствуютнизкой продукцииTNFα, ИФНγи ИЛ10 и высокойпродукции ИЛ6по сравнениюс кавказскимнаселением.Эволюция этогоуникальногогенотипа цитокиновогопрофиля можетбыть связанас адаптациейаборигеновк давлениюотбора окружающейсреды, в которойпреобладаютгельминты, паразиты игрибковыеинфекции [22].

Инфекционныепатогенны, такие как M.tuberculosis и RSVпродолжаютиметь разрушительныйэффект в некоторыхсевероамериканскихпопуляциях.Например, вКанаде 43% из всехновых активныхи рецидивныхслучаев туберкулезапроисходятсреди аборигенов,37% случаев – средииндивидуумовиностранногопроисхожденияи 20% — среди рожденныхв Канаде, но неаборигенов.В то время какбольшинствоизученийсфокусированона социоэкономическихразличиях, небольшоевнимание тратитсяна генетическиеразличия, которыемогут существоватьсреди человеческихпопуляций ирегулироватькачество иммунногоответа на данныйпатоген. Изученияинбредных мышейясно демонстрируют, что генетическийфон играетключевую рольв определениикачества цитокиновогоответа (Тх1против Тх2), который в своюочередь затрагиваетспособностьхозяина уничтожатьинфекционногоагента.

С завершениемпроекта расшифровкигенома человекастало очевидно, что полиморфизмыодного нуклеотида(SNPs) являютсяобычными и взависимостиот локализациимогут затрагиватьуровни транскрипциигенов. В контекстеиммунногоответа хозяинана инфекционногоагента идентификацияразличий вцитокиновыхSNPs профиляхможет иметьважные значениядля сопротивленияорганизмахозяина иливосприимчивостик данномуспецифическомуагенту. Текущееизучение описываетчастоту SNPs, которая, какизвестно, коррелируетс дифференциальнойэкспрессиейгенов ИЛ6, ИЛ10, ТНФα, ИФНγи ТФРβв кавказской, канадскихаборигенови филиппинскойкогортах ипостулирует, почему определенныецитокиновыеSNPs профилимогут развиватьсяна популяционномуровне.

В двух независимыхопытах былонайдено, чтоэтническиепопуляции имеютстатистическоеразличие вцитокиновыхSNPs профилях.Вначале былозамечено, чтоцитокиновыегенотипы усевероамериканскихаборигенови филиппинцевс ESRD имеютзначительныеразличия посравнению скавказцамис конечнойстадией даннойпочечной болезни.Во втором опыте, в который быливовлеченынормальныеконтрольныепопуляциикавказскихиндивидуумови аборигенов, были подтвержденыпервоначальныенаблюдения.

По сравнениюс когортамиаборигенови филиппинцев, кавказцы поддерживаютвысокую частотуТНФαи ИФНγаллелей SNPs, чья фенотипическаяэкспрессияассоциированас увеличениемпродукции этихцитокинов.Противоположностькавказскойкогорте индивидуумыфилиппинскогопроисхожденияимеют высокуючастоту ИЛ6аллели, ассоциированнуюс высокой продукциейданного цитокина.Аборигеныподдерживаютстатистическивысокую частотуаллеля «G»в ТНФαи поэтому имеютнизкую продукциюэтого цитокинапо сравнениюс кавказскойкогортой. Точнотакже аборигеныподдерживаютстатистическивысокую частотуаллеля «А» вИФНγ, которая ассоциированас низкой продукциейэтого цитокина.

Кавказцымогут поддерживатьТх1 иммунныйответ, в то времякак SNPs частотыв регионахпромотеровцитокиноваборигенови филиппинцевимеют тенденциюк поддержаниюТх2 иммунногоответа. Дляобъясненияданных генетическихразличий нужноучесть историческийконтекст, вкотором развивалисьпопуляции сих микробнойсредой [22].

Старая мироваякавказскаяпопуляция втечение последних11 тысяч летзанималасьохотой и собирательством.Для одних этовключалоодомашниваниерастений иживотных, оседаниеи последующаяурбанизация.Эти измененияв пропитаниии образцахпоселениязакончилисьглубокимиизменениямив микробнойсреде СтарогоСвета. С появлениемсельскогохозяйства иурбанизациитак называемые«инфекции толпы»стали превалирующими, и эпидемииоспы, кори, чумыи туберкулезараспространялисьпо Европе [21]. Сданными патогенамибыл связанвысокий уровеньсмертности, что оказывалоинтенсивноеселективноедавление напопуляцию.Например, учитываявысокую распространенностьтуберкулезнойинфекции, ведущейк преждевременнойсмерти в Европе(примерно 18столетие), выживалите индивидуумы, которые моглиэффективновоздействоватьна патоген спомощьюгиперчувствительностизамедленноготипа. Этот типответа характеризовалсявысоким уровнемэкспрессиицитокинов ТНФαи ИФНγ.Действительно, когда анти-ТНФαвводился пациентамс воспалениемкишечника, тоэто ассоциировалосьс возникновениемили реактивациейтуберкулеза, что подтверждаетважную рольТНФαкак иммунногомодулятораили нейтрализаторатуберкулеза.ОпределенныеSNPs в регионепромотера ТНФαбыли вовлеченыв инфекционныеболезни, такиекак малярия.

Схожим образомИФНγимеет важнуюроль в защитеорганизмахозяина отмикобактерий, хотя продукцияИФНγне может адекватноконтролироватьинфекцию безприсутствиядругих цитокинов.До настоящеговремени нетсвидетельстваот изученияпопуляций, чтообщие вариантыв генах рецепторовк ИФНγвлияют навосприимчивостьк туберкулезу.Были случаиинактивациимутаций в рецепторек ИФНγ, которые былиассоциированыс чувствительностьюк обычнымнепатогенныммикобактериям.В пределахдругих цитокинову животныхмоделей недавнобыло найдено, что экспрессияИЛ6 макрофагамиможет препятствоватьэффективномусдерживаниютуберкулезнойинфекции. Приизучении кавказскойпопуляции былозамечено, чтоона поддерживаетотносительновысокую частотуSNPs цитокинов, что приводитк гиперчувствительностизамедленноготипа и низкомууровню экспрессииИЛ6 по сравнениюс другими когортами.Учитываявышеупомянутуювысокую распространенностьтуберкулезав Европе с 1700 годадо ранних 1900-х, когда быларазвита эффективнаяантимикробнаятерапия, можнообъяснитьцитокиновыйSNPs профиль, наблюдаемыйсегодня в кавказскойпопуляции.

ПопуляцииаборигеновСеверной Америкииспытали уникальныйнабор эволюционныхдавлений из-заих миграциичерез Берингов«Земной мост»(приблизительно15-20 тысяч летназад) и их изоляцииот популяцийСтарого Светаприблизительнос 1400 года нашейэры. Аборигенывели охотничийи собирательскийобраз жизни(это существовалои в Старом Свете), это способствовалодиффузномурасселениюс низкой плотностьюнаселения.Анализ патологийв человеческихскелетныхостанках древнихаборигеновуказывает, чтопаразитическиегрибковыеинфекции инедоеданияприсутствовалиу древних людей.Употреблениесырого илинедостаточноприготовленногомяса, условияжизни в зимнеевремя и определенныеобразцы поедаемыхдиких растенийпривели к тесномуконтакту этихлюдей с грибковымиинфекциямии паразитамии сделали ихуязвимыми ксезоннымавитаминозам.Микробная средаспособствовалапозитивнойселекции Тх2типа адаптивногоиммунногоответа длявыживания.Действительно, изучение семействаборигеновЮжной Америкиво время инфекцииShistosoma mansoniподтвердилизащитную рольТх2 типа цитокинов: ИЛ4, ИЛ6, ИЛ13, — в защитепротив паразитическойинфекции. ЧрезмернаяэкспрессияТх2 типа цитокинов(ИЛ6, ИЛ10) индуцируетгиперактивностьВ-клеток, котораяхарактернадля системнойкрасной волчанки.Полиморфизмыв промотерахрегионов ТНФα, ИФНγ, ИЛ10 и ИЛ6 ассоциированыс дифференциальнымиуровнями экспрессииданных цитокинов.Сохранениеданных полиморфизовпопуляции можетпривести кселективномупреимуществу.В контекстесуществующихисследованиифакт, что цитокиновыйSNPs профильу канадскихаборигеновискажен в сторонувысокой продукцииИЛ6 и относительнонизкой ТНФα, ИФНγ, поддерживаяконцепциюнизкой распространенностиM. tuberculosis вданных популяцияхдо контактас европейцами.

SNP частотыцитокиновфилиппинцевпохожи с аборигенамиСеверной Америки.Общее азиатскоенаследие популяцииаборигенови филиппинцеви их параллельныемиграции изевропейскогоконтинентаболее 12 тысячлет назад моглипривести кданному сходству.

Изученияинфекционныхболезней средипопуляцииаборигеновсосредотачивалисьна социоэкономическихфакторах, способствующихустойчивостик заболеваниямили восприимчивости.В большинстведанных исследованийгенетическиеразличия междупопуляциямипризнаныспособствующимифакторами ввосприимчивостик болезням илив устойчивости.Хотя основаниядля данногогенетическогонеравенстваостаются взначительнойстепени неизведанными.Чувствительностьк туберкулезу, например, вотносительноизолированнойЮжной Америкевысока. Хотяиндивиды свысоким уровнемпитания исоциоэкономическимстатусом одинаковоподверженыопасностямзаболевания, как индивидыс низким уровнемпитания исоциоэкономическимстатусом.Предполагается, что высокийуровень продукцииантител иТх2-опосредованнойактивации уюжноамериканцевконкурируетс Тх1-опосредованнойзащиты, необходимойдля эффективнойборьбы противинфекционныхболезней, такихкак туберкулез.Популяциисевероамериканскихаборигеновв Манитобеимеют самуювысокую сферудействия туберкулезаотносительнодругих местныхпопуляций.Неравный рискзаболеваниямежду этническимипопуляциямиможет бытьчастично объясненокружающимиусловиями исоциоэкономическимиразличиями.SNPs цитокиновмогут такжеиграть рольв данной изменчивости.

В итоговомэтническомкладе вероятенфактор наблюдаемыхразличий частотSNPs цитокинов.Данные различиямежду кавказской, популяциейаборигенови филиппинцевмогут частичноотразить тотфакт, что данныепопуляцииразвивалисьв ответ населективноедавление ихмикробных сред[22].

Глава6. Ассоциациятуберкулёзасо специфичностямигена HLA-DR-B1в различныхрегионах Тувы

Генетическиефакторы взначительноймере определяютвосприимчивостьк различнымзаболеваниям, в том числе иинфекционнойприроды. Туберкулезв этом отношениине являетсяисключением.Определенныйвклад в восприимчивостьк туберкулезувносят генысистемы HLA, которыедетерминируютразличныеиммунологическиефеномены. Имеютсямногочисленныеработы, в которыхобнаруженаположительнаяассоциацияантигенов HLA сзаболеваниемтуберкулезом.Считается, чтонаиболее значимымиявляются ассоциациитуберкулезас генетическимимаркерамилокуса HLA-DR, посколькув этом локусерасполагаютсягены иммунногоответа. Этотфакт можноиспользоватьдля формированияпо генетическиммаркерам системыHLA групп рискав отношениизаболеваниятуберкулезом.В то же времяпоказано, чтов различныхпопуляцияхс заболеваниемтуберкулезомассоциируютсяразные антигеныHLA.

В рядеработ не былообнаруженозначительныхразличий вовстречаемостиантигенов HLA убольных туберкулезоми здоровых лиц.Возможно, этосвязано илис малочисленностьюматериала, илис неправильноподобраннымисравниваемымигруппами, посколькув подавляющембольшинстверабот обнаруженаположительнаяассоциацияантигенов HLA стуберкулезом.В то же времяисследованияв разных регионахРеспубликиТува выявилиположительнуюассоциациютуберкулезасо специфичностямиHLA-DR-B1 13(6) и HLA-DR-B1 14(6). Возможно, высокая заболеваемостькоренногонаселения Тувыассоциированас названнымиспецифичностямигена HLA-DR-B1, что связанос национальнымиособенностямикоренногонаселенияРеспубликиТува [9].

Глава7. Распределениеантигеновкомплекса HLAу больныхтуберкулёзоми здоровых лицв татарскойпопуляции

Результатыизученияраспределенияантигенов HLA уздоровогонаселенияобследованныхпопуляций(русской, молдавской, узбекской, туркменскойи тувинской)вошли в сборникисследованийпо генофондунаселенияРоссии и сопредельныхстран, проводимыхРоссийскойакадемией наук.

Перваяработа в этомпо распределениюантигенов HLAнаселенияреспубликиТатарстан былавыполнена в2003 г. в 4 районахСеверо-Западнойи Прикамскойчастей Татарстана(Арский, Балтасинский, Высокогорскийи Атнинский).Татарскоенаселение этихрайонов проживаетв указаннойместности напротяжениижизни не менее4 поколений, что установленометодом опроса.

Иммуногенетическомуисследованиюпредшествовалоизучениеэпидемиологическойситуации потуберкулезу- заболеваемости, болезненности, смертности.

Изученораспределениеантигенов HLAпервого классау здоровых лици больных активнымтуберкулезоморганов дыхания, выявленныхв 2002 г.

Статистическидостовернаяразница междучастотамивстречаемостиантигенов трехисследованныхлокусов системыHLA обнаруженатолько дляантигена HLA-B22. Этоуказывает нато, что по крайнеймере в этойчасти Татарстанау больных активнымтуберкулезомлегких существуетассоциацияс антигеномВ22 [2].

Такимобразом, в результатеисследованияраспределенияантигеновкомплекса HLAпервого классав татарскойэтническойгруппе (4 районаТатарстана)установлено, что у больныхактивным туберкулезомлегких существуетассоциацияс антигеномHLA-B22.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

/>Открытиеантигеновтканевойсовместимостиу человека HLA(Human Leucocyte Antigens)положило началоуспешномуразвитиюкооперативныхинтернациональныхисследований, в которых участвуютвсе лабораториимира, занимающиесятканевойсовместимостью.Проведеноисследованиераспределениякомпонентовкомплекса HLA вбольшинствепопуляций мира.

Успехитрансплантологии, с одной стороны, и достиженияклиническойгенетики ииммуногенегики— с другой, диктуютнеобходимостьпродолжатьисследованияв нашей стране.

Подобныеисследованиябыли начатыв 80-е годы XX столетияв ЦентральномНИИ туберкулезаРАМН под руководствомакад. РАМН А.Г. Хоменко ипроф. В. И. Литвиноваи получилиразвитие впоследние годы[16].

В условияхэкспедицийв ряде регионовРоссии и странСНГ проведеныкомплексныеклинические, генетико-эпидемиологическиеи иммунологическиеисследованиягрупп коренногонаселения сразличнойэтническойпринадлежностьюи эпидемическойситуацией потуберкулезу.Изучениераспределениякомпонентовкомплекса HLAсреди здоровогонаселения иу больныхтуберкулезомлегких проведенов русской, узбекской, туркменской, молдавской, тувинскойпопуляциях.Для каждойпопуляции былиобнаруженысвои особенностив частотахвстречаемостиантигенов HLA ихарактерныедля даннойпопуляцииассоциациис восприимчивостью(или резистентностью)к туберкулезулегких.

В проведенныхисследованияхв русской популяцииМосквы и Московскойобласти найденаассоциациятуберкулезалегких с антигенамиВ5 и В17, в молдавской— с антигенамиВ5 и В38, в узбекской— с антигеномВ12, в армянской- с В12 и В35, в тувинской— с В15. Отличиев этом отношениитатарскойпопуляции отдругих (ассоциацияс антигеномВ22) может бытьобъяснено либоособенностямиэтногенезавсего татарскогонаселенияреспублики, либо генетическимиособенностямитатарскогонаселения этихрайонов Татарстана, обособленногов генетическомплане в субизолят.Это можетподтвердитьсяпосле иммуногенетическогообследованиябольшей частирайонов республики.

В рядеработ не былообнаруженозначительныхразличий вовстречаемостиантигенов HLA убольных туберкулезоми здоровых лиц.В подавляющембольшинстверабот обнаруженаположительнаяассоциацияантигенов HLA стуберкулезом.В то же времяисследованияв разных регионахРеспубликиТыва выявилиположительнуюассоциациютуберкулезасо специфичностямиHLA-DR-B1 13(6) и HLA-DR-B1 14(6). Возможно, высокая заболеваемостькоренногонаселения Тувыассоциированас названнымиспецифичностямигена HLA-DR-B1, что связанос национальнымиособенностямикоренногонаселенияРеспубликиТува.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Баранов В.С., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., Асеев М.В. Геномчеловека и гены«предрасположенности».Введение впредиктивнуюмедицину. — 2000. — 271 с.

2.Гергерт В.Я., Валиев Р.Ш., ЧукановаВ.П. Распределениеантигеновкомплекса HLAу больныхтуберкулёзоми здоровых лицв татарскойпопуляции. //Проблемы туберкулёзаи болезни лёгких.– 2004. — №2. – с. 45-46.

3.Гриппи М.А.Патофизиологиялегких. — 1997. — 344 с.

4.Иващенко Т.Э., Сиделева О.Г., Петрова М.А. идр. Генетическиефакторы предрасположенностик бронхиальнойастме // Генетика.- 2001. — Т.37. — №1. — с.107-111.

5.КомогороваЕ.Э., КостенкоЕ.В., СтахановА.Н. Особенностииммунологическихпоказателейу больных сразличнымиформами туберкулёзалёгких. // Клиническаяиммунология.– 2005. — №1 – с. 45-50.

6.Ляхович В.В., Вавилин В.А., Макарова С.И.и др. Роль ферментовбиотрансформацииксенобиотиковв предрасположенностик бронхиальнойастме и формированииособенностейеё клиническогофенотипа // Вестн.РАМН. — 2000. — №12. — С.36-41.

7.Макарова С.И., Вавилин В.А., Ляхович В.В., Гавалов С.М.Аллель NAT285– фактор устойчивостик заболеваниюбронхиальнойастмой у детей// Бюллетеньэкспериментальнойбиологии имедицины. — 2000. — Т.129. — №6. — с.677-679.

8.Маянский А.Н.Туберкулёз(иммунологическиеи иммунопатогенетическиеаспекты). // Клиническаяиммунология.– 2001. — №2. – с. 53-65.

9.Поспелов Л.Е., Матракшин А.Г., Ларионова Е.Е.Ассоциациятуберкулёзасо специфичностямигена HLA-DR-B1в различныхрегионах Тувы.// Проблемытуберкулёзаи болезни лёгких.– 2005. — №2. – с.23-24.

10.Поспелов Л.Е., Серова Л.Д., КалининаН.М. HLA-DR-антигеныу больныхтуберкулёзоми здоровыхревакцинированныхБЦЖ лиц. // Проблемытуберкулёзаи болезни лёгких.– 2003. — №2. – с.82-83.

11.Пузырев В.П.Медико-генетическоеисследованиенаселенияприполярныхрегионов. — 1991. — 200 с.

12.Пузырев В.П.Состояние иперспективыгеномных исследованийгенетическойкардиологии// Вестн. РАМН.- 2000. — №7. — с.28-33.

13.Пузырев В.П.Генетика артериальнойгипертензии(современныеисследовательскиепарадигмы) //Клиническаямедицина. — 2003. — №1. — с.12-18.

14.Пузырев В.П., Огородова Л.М.Геномная медицинав решении проблемпульмонологии// Вестн. РАМН.- 2000. — №12. — с.45-48.

15.Пузырев В.П., Огородова Л.М., Салюкова О.А.Генетическиеосновы этиопатогенезабронхиальнойастмы // Сиб. мед.журнал. — 1998. — №3. — с.82-85.

16.Соафер В.Н.Международныйпроект «Геномчеловека» //Соросовск.образ. Журнал.- 1998. — №12. — С.4-11.

17.Степанов В.А., Пузырев К.В., СпиридоноваМ.Г. и др. Полиморфизмгенов ангиотензин-превращающегофермента иэндотелиальнойсинтазы окисиазота у лиц сартериальнойгипертензией, гипертрофиейлевого желудочкаи гипертрофическойкардиомиопатией// Генетика. — 1999.- Т.34. — №11. — с.1578-1581.

18.СуздальцеваТ.В. Иммунопатологическиеаспектыаспирин-индуцированнойбронхиальнойастмы // Аллергология.- 1999. — №4. — с.16-18.

19.Хаитов Р.М., АлексеевЛ.П. Физиологическаяроль главногокомплексагистосовместимости.// Клиническаяиммунология.– 2001. — №3. – с. 4-12.

20.Хаитов Р.М., БоговаА.В., Ильина Н.И.Эпидемиологияаллергическихзаболеванийв России // Иммунология.- 1998. — №3. — С.4-9.

21.Шевченко Ю.Л.Значение социальныхфакторов вовзаимодействиичеловека имикроорганизмов.Роль здравоохраненияв профилактикеи леченииинфекционныхзаболеваний// Вестн. РАМН.- 2000. — №11. — с.7-11.

22. Larcombe L., Rempel J.D., Dembinski I. Differentialcytocine genotipe frequencies. // Genes and Immunity. — 2005. — №6.– p.140-144.

23. Markus S., Samuel M. Behar. Role of CD1d-RestrictedNKT Cells in Microbal Immunity. // Infection and Immunity. — 2003. — №10. – p.5447-5455.

24. Natural reviews / Microbiologi. — 2004. — №2.- p. 747-754.

25. Trends in Microbiologi. — 2000. — №9. — p.419-425.

ПРИЛОЖЕНИЯ

Рисунок1. Процессинги экспрессияHLA-пептида.

/>

Рисунок 2.Персистентныемикобактериальныеинфекции ииммунный ответхозяина.

/>

Рисунок 3.Т-клеточныепопуляции, вовлечённыев антимикробнуюзащиту.

/>

Рисунок 4.Встреча CD1молекул сгликолипидами.

/>