Лекция: Методы рекомбинантной ДНК

Эти методы по­зволяют анализировать фрагменты ДНК, находить и изо­лировать отдельные гены и сегменты генов и устанавли­вать в них последовательность нуклеотидов.

Метод клонирования ДНК позволяет изолиро­вать отдельные гены или их части, транскрибировать (создавать их копии) и транслировать изолированные гены.

Это стало возможным благодаря открытию ферментов-рестриктаз. Эти ферменты опознают специфическую олигонуклеотидную последовательность в двухнитевой ДНК и разрезают ее в данном сайте (месте) (см. лекцию 8). Разные рестриктазы распознают различные последователь­ности нуклеотидоз и разрезают ДНК в разных сайтах.

Гибридизация нуклеиновых кислот. При этом методе линейные отрезки двухцепочечной ДНК подверга­ют тепловой обработке и получают одноцепочечные фраг­менты (денатурирование). Денатурированную ДНК инку­бируют при таких условиях (ť – 37°С), когда происхо­дит гибридизация, т.е. взаимное распознавание двух комплементарных нитей посредством спаривания азотистых оснований. Часто для идентификации порядка нуклеотидов используют в качестве «зонда» одну радиоактивную нить ДНК. Можно идентифицировать как полностью, так и частично гомологичные последовательности. Специфич­ность гибридизации нуклеиновых кислот позволяет об­наружить единственный ген среди десятков тысяч. Раз­личные модификации этого метода позволяют в клинике анализировать очень малые количества ДНК, взятые у больного.

Для широкого применения в практическом здравоох­ранении методов рекомбинантной ДНК необходимо со­здание библиотек радиоактивных зондов всех последова­тельностей ДНК генома человека, что теперь успешно выполняют.