Доклад: Решение конкретной ситуации

Зарастание экспланта агробактериями и его гибель произошли в результате увеличение периода инкубации с 24-48 часов до 58. Эксплан­ты переносят в чашки Петри со средой Гамборга без фитогормонов и выдерживают в темноте 24...48 ч или до появления вокруг эксплантов слабого бактериального ореола.

Продолжительность инкубации должна быть достаточной для того чтобы произошла трансформация растительных клеток; в то же время увеличение периода инкубации может привести к зарастанию экспланта агробактериями и его гибели. Далее экспланты переносят в чашки «Петри с селективной' средой Гамборга, содержащей регуляторы роста: кинетин (2 мг/л) и 2,4-Д (0,1 мг/л) для регенерации расти­тельных клеток, а также антибиотик канамицин (100 мг/л) для се­лекции трансформированных клеток и антибиотик цефотаксим (500 мг/л) для подавления роста агробактериальных клеток. Через 2...5 нед на эксплантах начинают развиваться маленькие побеги. Срезанные побеги (0,7… 1,0 см) переносят на новую среду для уко­ренения (среду Гамборга без добавления фитогормонов либо на среду Гамборга с добавлением 0,1 мг/л ИУК). Часто для поддержа­ния селективного фона в среду для укоренения добавляют кана­мицин (50… 100 мг/л). Полученные растения-трансформанты используют для выделе­ния ДНК и дальнейшей проверки их трансгенной природы.