Доклад: Определение белка по адсорбции красителя

Метод основан на измерении интенсивности окраски раствора после адсорбции белками части красителя и их осаждения в присутствии лимонной кислоты. С помощью данного метода можно быстро определить содержание белка в растворе при достаточно хорошей воспроизводимости результатов и высоком коэффициенте корреляции с методом Кьельдаля.

Определение содержание общего и остаточного азота методом Къельдаля

Содержание белковых веществ в продукте определяют по количеству белкового азота, который находят по разнице между количеством общего и небелкового азота с учетом коэффициента пересчета азота на белок.

Содержание азота для многих белков близко к 16%, поэтому количество белковых веществ вычисляют, умножая полученное количество азота на коэффициент 6, 25.

Для определения содержания массовой доли белков соединительной ткани пользуются коэффициентом 5,62, принимая во внимание, что содержание азота в коллагене 17,8%, белков молока и молочных продуктов – коэффициентом 6,37, белков сои – 6,25

Метод определения азота основан на минерализации органических соединений с последующим определением азота по количеству образовавшегося аммиака.

Минерализация проводится нагреванием навески с концентрированной серной кислотой в присутствии катализатора (ртутно-кадмиевая соль или сульфатная смесь, или перекись водорода). Выделившийся аммиак вступает в реакцию с избытком концентрированной серной кислоты и с образованием сульфата аммония. (Рис.3)

Для выделения аммиака сульфат аммония разлагают концентрированным гидроксидом натрия. Выделившийся аммиак поглощается титрованными растворами серной кислоты. Избыток серной кислоты оттитровывают гидроксидом натрия и по количеству связанной кислоты вычисляют количество поглощенного аммиака или соответствующее ему количество азота.

Порядок выполнения работы:

1.Отбор навески ( 0,5-1,0 г);

2.Помещение навески на беззольный фильтр;

3.Помещение навески с фильтром в колбу Кьельдаля (100-150т мл);

4.Добавление концентрированной серной кислоты (10-15 мл);

5.Проведение минерализации с различными катализаторами;

6.Минерализации (50-60 мин до 5-6 часов.);

7.Охлаждение колбы и перенос ее содержимого в мерную колбу 100-200 мл (исходя из массы навески);

8.Доведение объема колбы дистиллированной водой до метки и перемешивание;

9.Отгонка аммиака в приборе;

10.Подготавка прибора;

11.Внесение в отгонную колбу через воронку 25 мл разбавленного минерализата (или количественно переносят содержимое колбы- минерализат);